Search Results

Abstract

Objetivos: Explorar sistematicamente as mudanças dinâmicas e a sequência temporal no processo de apoptose de células epiteliais corneanas após excesso de irradiação com ultravioleta B.
Métodos: A radiação ultravioleta B (144 mJ/cm²) foi utilizada para irradiar células epiteliais da córnea de rato durante 2h. A morfologia celular foi observada por meio de microscópio de contraste de interferência diferencial, e os números de diferentes tipos de células apoptóticas foram contados e registrados pelo software ImageJ. A viabilidade celular foi medida pelo método brometo de 3- (4, 5-dimetil-2-tiazolil) -2, 5-difenil-2-H-tetrazólio. A taxa apoptótica celular e a perda do potencial da membrana mitocondrial foram detectadas por meio de análises citométricas de fluxo. Os níveis de expressão de três genes apoptóticos foram medidos por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real em diferentes momentos dentro de 0-24 h após a irradiação.
Resultados: Após 144 mJ/cm² de irradiação com ultravioleta B por 2h, os níveis de expressão de caspase-8 e Bax foram maiores em 0h; o potencial da membrana mitocondrial diminuiu a 0h e permaneceu constante por 6h na cultura subsequente. Às 6h, a caspase-3 foi ativada. A diminuição da viabilidade celular e o aumento da taxa apoptótica atingiu o pico em 6h. A expressão de caspase-3 diminuiu dentro de 12 - 24 h, levando a um declínio na taxa apoptótica e alteração no estágio apoptótico.
Conclusões: As células epiteliais da córnea apresentaram uma apoptose rápida após excesso de irradiação com ultravioleta B, e esse processo foi associado tanto à via extrínseca como à via intrínseca.

Keywords: Irradiação com ultravioleta B; Radiação; Epitélio anterior; Célula epitelial; Sobrevivência celular; Apoptose; Ratos

Abstract

A paciente era uma mulher de 26 anos com refração manifesta, acuidade visual para longe não corrigida e corrigida de -7,00 × -4,50 a175°, 20/400 e 20/25 no olho direito e -3,25 × -5,25 a 179°, 20/200 e 20/25 no olho esquerdo. A espessura média da córnea foi de 733 e 749 µm, e a espessura epitelial máxima foi de 70 e 68 µm, respectivamente no olho direito e no esquerdo. Inúmeros cistos intraepiteliais foram observados no exame com lâmpada de fenda. Trinta meses após o femto-LASIK, a refração manifesta, a acuidade visual para longe não corrigida e corrigida eram respectivamente de 0,00 × -1,25 a 55°, 20/25 e 20/20 no olho direito e 0,00 × -0,50 a 135°, 20/20 e 20/20 no olho esquerdo. Neste caso de distrofia de Meesmann, a miopia foi tratada com sucesso com femto-LASIK de retalho espesso sem complicações ou ectasia.

Keywords: Ceratomileuse assistida por excimer laser in situ; Miopia; Distrofia corneana epitelial juvenil de Meesmann

Abstract

OBJETIVOS: Foram estudadas cinco técnicas de cultivo primário de células epiteliais de córnea humana para se determinar o melhor protocolo para a obtenção do maior rendimento de meio de cultivo condicionado para ser utilizado na diferenciação de células tronco mesenquimais para células epiteliais de córnea.
MÉTODOS: As técnicas de cultivo estudadas foram: explantes em frascos de cultivo com e sem tratamento hidrofílico de superfície, sobre membrana amniótica, com digestão enzimática e por raspado de córnea. O meio de cultivo condicionado foi coletado e as células tronco mesenquimais induzidas a se diferenciarem em células epiteliais da córnea utilizando o meio de cultivo condicionado. As células foram caracterizadas por citometria de fluxo com pan-citoqueratina e com os marcadores específicos da córnea, citoqueratina 3 e citoqueratina 12.
RESULTADOS: A técnica utilizando frascos com o tratamento de superfície apresentou o maior rendimento de meio de cultivo condicionado. Os frascos sem tratamento de superfície levaram a uma taxa de sucesso muito baixa. A digestão enzimática e a raspagem da córnea mostraram contaminação das culturas com fibroblastos de córnea. A cultura sobre membranas amnióticas só permitiu a coleta do meio de cultivo condicionado durante a 1ª confluência celular. A análise de citometria de fluxo confirmou o sucesso da diferenciação celular utilizando o meio de cultivo condicionado coletado, demonstrada pela expressão de citoqueratina 3 (95,3%), citoqueratina 12 (93,4%) e pan-citoqueratina (95,3%).
CONCLUSÃO: O cultivo de explantes de células tronco mesenquimais em frascos com tratamento hidrofílico de superfície é a melhor técnica para a obtenção de um alto rendimento de meio de cultivo condicionado.

Keywords: Cultivo de células; Células tronco mesenquimais; Diferenciação celular; Células epiteliais; Córnea; Meio de cultivo condicionado; Técnicas de cultivo

Abstract

PURPOSE: The epithelial–mesenchymal transition of human lens epithelial cells plays a role in posterior capsule opacification, a fibrotic process that leads to a common type of cataract. Hyaluronic acid has been implicated in this fibrosis. Studies have investigated the role of transforming growth factor (TGF)-β2 in epithelial–mesenchymal transition. However, the role of TGF-β2 in hyaluronic acid-mediated fibrosis of lens epithelial cell remains unknown. We here examined the role of TGF-β2 in the hyaluronic acid-mediated epithelial–mesenchymal transition of lens epithelial cells.
METHODS: Cultured human lens epithelial cells (HLEB3) were infected with CD44-siRNA by using the Lipofectamine 3000 transfection reagent. The CCK-8 kit was used to measure cell viability, and the scratch assay was used to determine cell migration. Cell oxidative stress was analyzed in a dichloro-dihydro-fluorescein diacetate assay and by using a flow cytometer. The TGF-β2 level in HLEB3 cells was examined through immunohistochemical staining. The TGF-β2 protein level was determined through western blotting. mRNA expression levels were determined through quantitative real-time polymerase chain reaction.
RESULTS: Treatment with hyaluronic acid (1.0 μM, 24 h) increased the epithelial–mesenchymal transition of HLEB3 cells. The increase in TGF-β2 levels corresponded to an increase in CD44 levels in the culture medium. However, blocking the CD44 function significantly reduced the TGF-β2-mediated epithelial–mesenchymal transition response of HLEB3 cells.
CONCLUSIONS: Our study showed that both CD44 and TGF-β2 are critical contributors to the hyaluronic acid-mediated epithelial-mesenchymal transition of lens epithelial cells, and that TGF-β2 in epithelial-mesenchymal transition is regulated by CD44. These results suggest that CD44 could be used as a target for preventing hyaluronic acid-induced posterior capsule opacification. Our findings suggest that CD44/TGF-β2 is crucial for the hyaluronic acid-induced epithelial-mesenchymal transition of lens epithelial cells.

Keywords: Hyaluronic acid; CD44; TGF-β2; Epithelial-mesenchymal transition; Epithelial cells; Capsule opacification